Tj kirk perte de poids

Utiliser score histologique, la quantification des cytokines pro-inflammatoires et de l'activité myéloperoxydase, on peut commencer à évaluer ces réponses observée dans la maladie intestinale inflammatoire.

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Abstract Les maladies intestinales inflammatoires MII englobe un éventail de pathologies intestinales, la plus commune qui sont la colite ulcéreuse CU et maladie de Crohn CD.

Les deux communications unifiées et de CD, lorsqu'elles sont présentes dans le côlon, de générer un profil de symptômes similaires qui peuvent inclure la diarrhée, des saignements rectaux, des douleurs abdominales et la perte de poids.

Les modèles animaux de la plage de la colite de ceux qui naît spontanément dans les souches sensibles de certaines espèces à ceux nécessitant l'administration de concentrations spécifiques de colite induisant des produits chimiques, tels que le dextran sulfate de sodium DSS. Chimique induite par les modèles d'inflammation intestinale sont les modèles les plus couramment utilisés et mieux décrit des MICI.

Adminidémonstration de DSS dans l'eau potable produit une colite aiguë ou chronique, selon le protocole d'administration. Ici, nous décrivons les méthodes par lesquelles développement de la colite et la réponse inflammatoire résultant peut être caractérisée après l'administration de DSS.

Côlon dommages histologiques est évaluée en utilisant un système de notation qui prend en compte la perte de l'architecture crypte, l'infiltration de cellules inflammatoires, des muscles tAbcès hickening, la déplétion des cellules caliciformes, et la crypte.

En outre, l'activité MPO peut être mesurée en utilisant un dosage colorimétrique et utilisé comme un indice d'inflammation.

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Fragments de tissus du côlon peut être utilisé pour déterminer l'activité de MPO et de la production de cytokines. Pris ensemble, ces mesures peuvent être utilisées pour évaluer la réponse inflammatoire dans l'intestindes modèles animaux de colite expérimentale. Protocol Log in or Start trial to access full content. Dans une hotte de biosécurité, verser la solution SSD stock dans des tubes de 50 ml Falcon un nécessaire par cage. Gardez la solution stock de tubes de remplissage en cas de besoin.

Remplacer l'eau potable dans chaque cage souris avec la solution SSD dans les tubes Falcon de 50 ml La durée dépendra du régime de DSS qui est utilisé. Souris ne devraient pas avoir accès à toute autre source d'eau.

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Les souris témoins sont donnés en eau potable autoclave sans DSS. Peser les souris quotidiennement et inscrire le montant du DSS consommées par jour. Cela permet de mesurer le volume approximatif de DSS consommée par cage par souris pendant toute la durée de l'expérience.

Perte de poids significative, la consistance des selles modifiées et les signes de sang dans les selles sont vus dès le jour 3 en utilisant ce protocole DSS particulier. Toutes les expériences doivent être approuvés par les animaux de l'institution du comité d'éthique et d'être en conformité avec le Protocole de l'utilisation des animaux approuvés AUP.

Pendant la durée de l'expérience, un indice activité de la maladie DAI score peut être évaluée afin d'évaluer la progression clinique de la colite. Le DAI est le score combiné de la perte de poids par rapport au poids initial, la consistance des selles, et des saignements. Au point le temps de choisir, de peser et de sacrifice des souris.

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Les souris peuvent être euthanasiés par dislocation cervicale après inhalation d'isoflurane tj kirk perte de poids par une autre méthode approuvée par l'animalerie de l'institution. À ce point, se reporter au tableau 1 et prendre note d'unny signes d'hémorragie rectale sang présent dans l'orifice anal ou prolapsus rectal tj kirk perte de poids chaque animal.

Utilisez des ciseaux à disséquer standards pour inciser l'abdomen par une incision médiane ventrale. Localisez le colon et le colon transect aussi près de la marge colorectal que possible 8 boules de perte de poids de libérer le côlon distal.

Soigneusement et tirez lentement tout le côlon, le détachant du mésentère environnant. Transect du côlon à la marge colonocecal pour libérer l'extrémité proximale du côlon.

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Utiliser tout le côlon, d'évaluer les dommages voir section 3. Évaluation de la gravité de la colite Score de sévérité ou de la maladie macroscopique est évaluée en phase terminale par un observateur impartial en utilisant un système de notation précédemment publiées tableau 1.

Utilisation du système de notation, de déterminer un score pour chacune des conditions.

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Le score final macroscopique pour chaque animal est la somme de chaque score individuel. Colon fragments peuvent être prises à partir de la proximale, mi-colon, ou de la section distale du côlon. Il est à noter que, contrairement humaine UC, abcès cryptiques ne sont pas caractéristiques de ce modèle et sont rarement vus; ulcérations microscopiques sont également rares.

Vos commentaires

Si certaines sections du côlon sont multiplestachés, les scores histologiques entre les sections similaires doivent être utilisés pour déterminer le score final pour chaque domaine c'est à dire au score histologique du côlon proximal par rapport au score histologique du côlon distal. Lorsque requis, la chaleur de re-dissoudre. Triton X est très visqueux à température ambiante et donc, devrait être légèrement chauffé avant utilisation.

La préparation des échantillons pour des analyses La préparation des échantillons pour l'analyse de MPO. Les échantillons doivent être conservés sur la glace en tj kirk perte de poids temps.

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Il est important de noter que des fragments du côlon similaire devrait être utilisé à partir de chaque répétition biologique ie sections sections distale ou proximale seule uniquement. Ajouter homogénéisateur talon à chaque tube échantillon. Si le poids du tissu est inférieure à 25 mg, ajouter le tampon à un ratio de Homogénéiser avec un homogénéiseur de tissus pour 4 min à 30 Hz. Répétez l'opération si le tissu n'est pas totalement homogène.

Recueillir le surnageant et jeter le culot résultant. La préparation des échantillons pour l'analyse des cytokines. Répétez les étapes 5. Ajouter 50 ul de cocktail inhibiteur de protéase PIC à 10 ml de tampon de lyse préparé. Ajouter 1 mL de la PIC et de solution tampon de lyse à chaque échantillon, indépendamment du poids.

Homogénéiser pendant 5 min à 30 Hz. Retirer homogénéisateur perles et centrifuger solutipendant 5 min à x g. La quantification des marqueurs inflammatoires Dosage de l'activité MPO Préparer o-dianisidine dichlorhydrate o-dianisidine solution en combinant 16,7 mg de dichlorhydrate d'o-dianisidine, 90 ml de dH 2 O et 10 ml de tampon phosphate de potassium. Cette solution doit être préparé pour chaque dosage. Ajouter 7 uL d'homogénat tissulaire préparé dans la section 5.

Utiliser une pipette multi-canaux à ajouter ul du mélange d'o-dianisidine contenant H 2 O 2 à chacun des puits.

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Mesurer l'absorbance à nm en utilisant une spectrophotométrieTometer. Prenez trois lectures à des intervalles de 30 secondes. Calculer l'activité MPO. Pour obtenir unités par mg de tissu, utilisez le tissu: ratio de la mémoire tampon. Par conséquent, pour obtenir unités par mg de tissu, la division des parts de MPO par 0, Un exemple de calcul utilisant des valeurs d'absorbance nm est inclus ci-dessous en supposant que l'échantillon a été ajoutée en triple exemplaire : Exemple.